PURIFICAÇÃO DE ALFA-AMILASE ISOLADA DE SEMENTES DE RICINUS COMMUNIS

  • Iuri M. Santos
  • Viviane V. Nascimento
  • Olga L. T. Machado
Palavras-chave: Alfa-amilase, Ricinus communis, Semente, Germinação

Resumo

As alfa-amilases são enzimas que constituem uma família de endoamilases e catalisam a hidrólise de ligações glicosídicas alfa-1,4 do amido, glicogênio e outros carboidratos, sendo amplamente distribuídas em plantas, animais e microorganismos. Essas enzimas têm um importante papel na degradação de amido durante a germinação e maturação da semente. A clivagem do amido pela ?-amilase constitui o primeiro passo na degradação enzimática de polissacarídeos o que é essencial na assimilação de carboidratos. Este trabalho tem como objetivo a purificação de isoformas de alfa-amilase de sementes germinadas de R. communis. Sementes de R. communis germinadas foram submetidas a extração de proteínas em tampão fosfato 50 mM pH 6,0, para purificação de isoformas de alfa-amilase foram empregados 3 passos: precipitação com acetona 75 %, cromatografia de troca iônica em resina DEAE-Toyorpeal e cromatografia de exclusão molecular, utilizando resina Sephacryl S-200 (Nirmala e Muralikrishna 2002), em todos os passos a atividade alfa-amilásica foi acompanhada in vitro (Bernfeld 1955) e por atividade em gel. Nossos resultados mostram a presença de pelo menos duas isoformas de alfa-amilase em sementes germinadas de R. communis, onde uma delas foi parcialmente purificada e caracterizada. O isolamento destas enzimas é um passo fundamental para a determinação das características cinéticas, bem como o papel fisiológico desempenhado pelas mesmas nas sementes. Além disto, tendo em vista que as alfa-amilases apresentam grande interesse por suas propriedades biomédicas e aplicações biotecnológicas, o isolamento e a caracterização destas isoformas poderácontribuir para a inclusão das alfa-amilases de mamona na indústria.

Biografia do Autor

Iuri M. Santos
Laboratório de Química e Função de Proteínas e Peptídeos, Universidade Estadual do Norte Fluminense – Darcy Ribeiro, Centro de Biociências e Biotecnologia, Campos dos Goytacazes - RJ - Brasil.
Viviane V. Nascimento
Laboratório de Química e Função de Proteínas e Peptídeos, Universidade Estadual do Norte Fluminense – Darcy Ribeiro, Centro de Biociências e Biotecnologia, Campos dos Goytacazes - RJ - Brasil.
Olga L. T. Machado
Laboratório de Química e Função de Proteínas e Peptídeos, Universidade Estadual do Norte Fluminense – Darcy Ribeiro, Centro de Biociências e Biotecnologia, Campos dos Goytacazes - RJ - Brasil.