REGULAÇÃO DA ATIVIDADE DE GSK-3 POR CÁLCIO EM CÉLULAS EMBRIONÁRIAS BME26

  • Ojana Bravin
  • Arianne Fabres
  • Anna Okorokova
  • Aoi Masuda
  • Carlos Logullo
Palavras-chave: Glicogênio Sintase Kinase, BME26, R. microplus

Resumo

A enzima glicogênio sintase kinase 3 (GSK3) é importante em diversos processos celulares. Existem evidências que o aumento da concentração citoplasmática do cálcio pode aumentar tanto a expressão quanto a atividade dessa proteína. Recentemente mostrou-se que a apoptose causada por cálcio pode envolver a ativação de GSK3 através do aumento de sua fosforilação. Este estudo pretende demonstrar que mudanças na concentração de cálcio podem modificar a atividade da GSK3. A viabilidade celular foi analisada em células tratadas com diferentes concentrações de cálcio (2,7mM; 5mM; 13mM e 65mM) por 2horas através do método de MTT. O silenciamento gênico foi realizado através do método de RNA de interferência utilizando-se dsRNA específico ou não para GSK3. Para a confirmação do silenciamento foi analisada a transcrição da GSK3 por PCR em tempo real. Para demonstrar o efeito do silenciamento sobre a atividade da GSK3 foi realizada dosagem de glicogênio, já que a GSK3 regula negativamente a síntese dessa reserva energética. A viabilidade celular foi avaliada em células incubadas com diferentes concentrações de cálcio.Observou-se uma queda de 25%; 31%; e 55% nas concentrações respectivas de cálcio de 5mM, 13mM e 65mM. Em células incubadas com dsRNA específica para GSK3 observou-se uma queda de 70% na transcrição dessa proteína. Além disso foi encontrado aumento em torno de 30% na concentração de glicogênio nas células com dsRNA específico para a GSK3, mostrando que a diminuição da transcrição interfere na atividade dessa proteína, já que a GSK3 está envolvida na regulação negativa da síntese dessa reserva energética, como descrito na literatura. Com estes experimentos pode-se observar que o cloreto de cálcio possui influência negativa na viabilidade celular da linhagem BME26. Também foi visto que esta linhagem pode ser silenciada para GSK-3 através do método de RNAi e que a diminuição da transcrição dessa proteína influência sua atividade.
Publicado
17-04-2013