A SINALIZAÇÃO POR H+: O PH CITOSÓLICO DETERMINA AS ATIVIDADES DE V H+-ATPASE E P H+-ATPASE DA LEVEDURA SACCHAROMYCES CEREVISIAE.

  • Mariana Miranda de Abreu
  • Layz Ribeiro da Silva Teixeira
  • Renan Modesto Monteiro
  • Lev Alexandrovitch Okorokov
Palavras-chave: NH4CI extracelular, PH -ATPase, VH -ATPase

Resumo

Em plantas e fungos, PH+-ATPase de membrana plasmática e VH+-ATPase da via secretória determinam a homeostase iônica que é chave para todos organismos. Ambas bombas são ativadas pela glicose extracelular, mas o sinal de ativação não é conhecido. Nossa hipótese: o aumento da concentração de H+ no citosol durante a glicólise é o sinal primário da ativação de bombas de H+. O objetivo do trabalho é avaliar se o aumento do pH intracelular usando NH4CI extracelular pode prevenir a ativação das bombas. A dissociação NH4+ = NH3 + H+ e a entrada de NH3 no citosol com formação de NH4+ diminuirá a sua acidificação, causada pela glicólise. O nível de NH3 eleva-se com o aumento do pH. Portanto, em pH7.7 espera-se prevenção da ativação das bombas mais efetiva que em pH7.2. Os esferoplastos isolados da levedura da cepa X2180, foram pré-incubados, em pH 7.2 ou 7.7, sem glicose; com glicose; com NH4CI+glicose e membranas totais foram isoladas. O transporte de H+ e a hidrólise de ATP mediados por cada bomba foram determinados. As atividades inibidas pelo vanadato ou resistentes a concanamicina foram de PH+-ATPase. Aquelas inibidas pela concanamicina e não inibidas pelo vanadato foram de VH+-ATPase. Achamos que a incubação dos esferoplastos com glicose durante 30 minutos em pH 7.2 causou a esperada estimulação de PH+-ATPase e de VH+-ATPase, além da prevenção parcial da ativação dessas duas bombas pelo NH4Cl. Isto vale para atividade hidrolítica de ambas enzimas e para o transporte de H+. No entanto, a ativação dessas atividades enzimáticas pela glicose e sua prevenção pelo NH4CI foram ainda mais efetivas em pH 7.7. Notamos que a regulação das bombas pela glicose é dependente do pH extracelular. Provavelmente, o transporte de H+ pela PH+-ATPase está mais facilitado em pH7.7, porque ela está liberada do controle protônico mais efetivamente. Dados suportam a nossa hipótese de trabalho. Concluímos que o pH 7.7 aumenta a efetividade do NH4CI em prevenir a ativação de P e VH+-ATPases pela glicose extracelular. O aumento de íons H+ no citosol devido à glicólise estimula estas bombas protônicas responsáveis pela homeostase de H+, apresentando mais um exemplo da sinalização por H+.
Publicado
24-04-2013