PURIFICAÇÃO E CARACTERIZAÇÃO DE PEPTÍDEOS DE SEMENTES DE SAPUCAIA (LECYTHIS PISONIS CAMB.)

  • Maria Eliza Brambila Vieira
  • Valdirene Moreira Gomes
  • André de Oliveira Carvalho
Palavras-chave: Purificação, peptídeos antimicrobianos, antifúngico

Resumo

Peptídeos antimicrobianos constituem o mecanismo primário de defesa dos organismos. Estes têm propriedades inibitórias contra vírus, bactérias, fungos e tumores. Por estas atividades são candidatos promissores para novas drogas. Sapucaia (família Lecythidaceae) tem sementes ricas em proteínas e lipídios (incluindo o linoléico, essencial para alimentação). O objetivo deste projeto é purificar e caracterizar peptídeos de sementes de sapucaia e analisar ação inibitória destes sobre microrganismos. O cotilédone (0,5g) foi macerado em nitrogênio líquido, deslipidado em éter de petróleo (15 ml, 1 h) e as proteínas extraídas (1% TFA, 1 M HCl, 5% ác. fórmico e 1% NaCl). A extração foi centrifugada (15.000g, 10 min) o sobrenadante filtrado e aplicado na coluna C8C18 (fase reversa). As frações obtidas foram analisadas por eletroforese (gel de tricina). Um ensaio de atividade biológica foi feito com os fungos Saccharomyces cerevisiae e Candida albicans. As frações que apresentaram atividade biológica foram recromatografados na coluna C8C18. Os novos gradientes foram montados baseados nos tempos de retenção de cada pico. As frações obtidas foram analisadas por eletroforese (gel de tricina). O procedimento de extração e a primeira cromatografia foram repetidos várias vezes para acumular material. Na cromatografia inicial foram obtidas 13 frações sendo 1 não retida e 12 retidas. Destas, as frações 4, 6 e 11 apresentaram atividade contra os fungos testados. Por este motivo estas foram selecionadas para as etapas posteriores de purificação. Estas frações foram submetidas à novas cromatografias sendo a fração 4, 6 e 11 separadas em 5, 15 e 5 novas frações, respectivamente. As cromatografias dos picos 4 e 6 apresentaram frações de proteína aparentemente pura com massa molecular majoritária entre 6 e 10 kDa. As frações majoritárias e homogêneas serão seqüenciadas para caracterização. A repetição da primeira etapa cromatográfica rendeu 13 frações que foram acumuladas. Destas, três (as frações 4, 6 e 11) apresentaram atividades contra duas espécies de leveduras. Estas foram recromatografadas e frações aparentemente puras de peptídeos foram obtidas para a fração 4 e 6.
Publicado
02-05-2013