TRANSIÇÃO MORFOGÊNICA EM YARROWIA LIPOLYTICA

  • Larinne Paiva Viégas
  • Anna l. Okorokova Façanha
  • Flávia de Azevedo Lobão
Palavras-chave: Dimorfismo, Auxina, Oxidase Alternativa

Resumo

Yarrowia lipolytica é um fungo dimórfico se apresentando na forma de levedura, pseudohifa e hifa. O Objetivo é analisar o efeito da auxina (AIA) e da enzima oxidase alternativa (AOX) da via respiratória no crescimento e na morfologia da mesma. A AIA é um hormônio produzido por plantas, mas que também pode ser encontrada em humanos, bactérias e fungos. A AOX é encontrada em mitocôndrias de todas as plantas, alguns fungos e protozoários, sendo inibida por ácido salicilhidroxâmico (SHAM). Foi feito um cultivo de Y. lipolytica com diferentes concentrações de SHAM (0,01, 0,05, 0,1, 0,5, 1 e 2 mM), na ausência e na presença de AIA 10 pM, em meio líquido e sólido, a fim observar e identificar a concentração que promove alterações tanto morfológicas como no desenvolvimento da cultura. Para determinação de extrusão de H+ foi realizado o ensaio de acidificação com as células na forma de levedura (18h), pseudohifa (22h) e hifa (25h). Para determinação do pH externo das colônias, uma solução de bromocresol 0,015% foi acrescentada ao meio sólido contendo as colônias desenvolvidas. As análises das culturas de Y. lipolytica em meio sólido (spot assay) e líquido demonstraram que a concentração de 2 mM de SHAM promove um crescimento inferior a condição controle e a condição que continha auxina em cerca de 30%, em conseqüência, observou-se um desenvolvimento morfológico alterado com inibição de 100% da transição levedura-hifa em ambas condições. E a cultura de Y. lipolytica apresentou uma acidificação maior na forma de levedura do que nas formas de pseudohifa e hifa, tanto na presença como na ausência de 10 pM de auxina. Portanto, a AOX é essencial para a transição morfológica de Y. lipolytica, visto que quando inibida não há formação de hifas mesmo na cultura contento indutor de filamentos (AIA). Também se notou um estimulo maior das H+-ATPases no estágio de levedura que durante o período de transição dimórfica.
Publicado
03-05-2013