ATIVIDADES DE PROTEINASES CISTEÍNICAS EM TEGUMENTOS DE SEMENTES QUIESCENTES DE Albizia sp., Cicer arietinum E Lens culinaris

Resumo

Morte celular programada (MCP) é um processo regulado que ocorre em organismos pluricelulares e causa o suicídio de uma célula. Células vegetais sofrem processos particulares de MCP, que requerem estudos mais  aprofundados. Em relação ao tegumento de sementes, esses eventos também são carentes de esclarecimentos. Tendo isso em vista, esse trabalho visa o diagnóstico e análise bioquímica de tais eventos em tegumentos de sementes quiescentes de Albizia sp., Cicer arietinum e Lens culinaris. Estas foram processadas, passaram por extração em tampão fosfato de sódio monobásico pH 7.5, 100 mM, 1% PVPP e centrifugação a 10.000g na temperatura de 4ºC por 20 minutos. Proteínas dos pós das amostras foram quantificadas por Bradford (1976) e a determinação de atividades de proteínases cisteínicas utilizou azocaseína em pH 5.6 como substrato e papaína para a construção da curva padrão. Ensaios eletroforéticos foram realizados segundo Laemmli (1970) com gel na concentração de 15% para amostras fervidas por 2, 5, 10, 15 minutos e sem fervura. A revelação foi por prata segundo Dunn et al (1994) e os géis de atividade tiveram 0.1% de gelatina e incubação de 16h em tampão de incubação. A determinação in vitro de atividade enzimática de proteinases cisteínicas não permitiu a detecção destas proteinases. Em contraste, os ensaios eletroforéticos detectaram atividades enzimáticas para todas as amostras, estas, com perfis diferentes. Em relação à fervura, Albizia sp. não apresentou perda de atividade da única banda; em C. arietinum houve uma perda massiva de atividade das duas bandas já após 2 min de fervura e, em L. culinaris, ocorreu perda de uma e manutenção de duas das três bandas de atividades. O próximo passo será a realização dos ensaios com inibidores e substratos específicos a diferentes caspases, para possível correlação das atividades enzimáticas com MCP.