PRODUÇÃO DE ANTICORPOS MONOCLONAIS ANTI-TOXOPLASMA GONDII PARA DIAGNÓSTICO EM FEZES E SOROS DE CRIANÇAS EM ÁREA HIPER-ENDÊMICA PARA A TOXOPLASMOSE

Autores

  • Keyssine De Oliveira Silva Ribeiro
  • Alba Lucínia Peixoto Rangel
  • Marcela Santana Bastos Boechat
  • Liliani De Souza Elias
  • Lílian Maria Garcia Bahia Oliveira

Palavras-chave:

Anticorpos monoclonais, Toxoplasma gondii, Diagnóstico

Resumo

Em Campos dos Goytacazes, cerca de 80% da população de baixo poder aquisitivo apresenta-se infectada pelo parasita Toxoplasma gondii. O percentual de infecção na população de 0 – 4 anos de idade apresenta-se menor do que se poderia supor. Este trabalho tem como objetivo produzir anticorpos monoclonais contra antígenos do Toxoplasma gondii visando subsidiar protocolo para o diagnóstico da toxoplasmose em soro e fezes de crianças com risco de infecção na faixa etária de 0 a 4 anos.Camundongos BALB/C fêmeas foram imunizados com antígeno de T. gondii e, o camundongo que apresentou maior titulação teve seu baço retirado para fusão dos esplenócitos com células de mieloma. Os hibridomas positivos ao ELISA foram clonados e subclonados para obtenção de monoclones que produzissem anticorpos específicos ao reconhecimento do antígeno. Posteriormente, utilizou-se os hibridomas positivos para produção de ascite em camundongos. Os ascites obtidos foram submetidos a precipitação seqüencial com ácido caprílico e sulfato de amônio para purificação das imunoglobulinas e posterior utilização das mesmas em testes imunodiagnósticos.Dos 3 hibridomas que permaneceram positivos após a subclonagem, um (9G41/15) apresentou-se positivo apenas pelo método de ELISA. Os outros dois hibridomas (2E4/4 e 2E4/19) reconheceram especificamente o antígeno pelo método de Imunoblotting, mas não reconheceram por ELISA. Os anticorpos que foram produzidos pelos hibridomas (2E4/4 e 2E4/19) reconheceram três bandas na faixa de 30 kDa, dado importante visto que a p30 é uma proteína altamente imunogênica, que induz a produção de anticorpos IgG, IgM e IgA relevantes no contexto da resposta imune ao T. gondii. Os anticorpos purificados dos líquidos ascíticos também estão sendo novamente testados quanto ao reconhecimento pelo parasita.Anticorpos monoclonais anti-T. gondii foram produzidos com sucesso e serão, futuramente, submetidos a marcação por biotina para utilização como ferramentas de diagnóstico para toxoplasmose em ensaios em fluidos corporais (soros, plasma, humor aquoso) e fezes de crianças.

Publicado

01-03-2012