TRANSIÇÃO MORFOGÊNICA EM CANDIDA ALBICANS

Autores

  • Larinne Paiva Viégas
  • Flávia De Azevedo Lobão
  • Anna L. Okorokova Façanha

Palavras-chave:

Levedura, Auxina, Alumínio

Resumo

A transição de levedura-hifa no fungo C. albicans é determinante para a virulência, sendo capaz de colonizar um grande espectro de ambientes onde condições são altamente variáveis. Neste projeto estudamos o efeito da auxina (AIA) e do alumínio na transição. Auxina é um fitohormônio, podendo ser encontrada em humanos, bactérias e fungos. O alumínio é um fator fito- e neurotóxico. Estudos prévios mostram que tanto auxina como alumínio interferem com o controle de polaridade e a homeostase iônica.As culturas de levedura foram crescidas em pH 4,5, 5,5, 6,0, 7,0 e 8,0 a 30, 37e 39ºC em meio YPD (1% extrato de levedura, 2% de glicose e peptona) sob agitação de 250 rpm nas três condições: controle, 1 mM AlK(SO4)2 e AIA 10 pM. A morfologia celular foi observada no microscópio. Para determinação do pH externo da colônia uma solução de 0,15% de bromocresol em 2% de agarose foi acrescentada às placas. Para determinação de extrusão de H+ foi realizado o ensaio de acidificação com as células crescidas em pH 4,5 a 39ºC por 16h e ressuspendidas em Tampão de 10mM Tris pH 6,0, monitorando o decaimento de pH.Controle de pH ambiental da colónia revelou a acidificação do meio. Para a quantificação do transporte de H+ foi realizado o ensaio de acidificação com células de levedura. Não teve a diferença entre as células na condição controle e células expostas ao Al, porém na presença de AIA houve a estimulação da acidificação (48%) em relação ao controle. Quanto à ocorrência da transição morfogênica, verificamos que após 4 hr do início do cultivo, em todos os pHs as células sofreram a mudança da morfologia e polaridade celular com predominância de pseudohifas, sendo que no final do cultivo houve a inibição da transição dimórfica.Tratamento com AIA resultou em uma acidificação maior do meio extracelular quando comparada com o Al e controle, sugerindo a estimulação da H+-ATPase. Todavia, estimulo da extrusão de prótons não foi suficiente para interferir com a transição morfogênica.

Publicado

03-04-2012