EXTRAÇÃO E PURIFICAÇÃO DE PEPTÍDEOS ANTIMICROBIANOS DE SEMENTES DE SAPUCAIA (LECYTHIS PISONIS CAMB.)

Autores

  • Maria Eliza Brambila Vieira
  • Valdirene Moreira Gomes
  • André De Oliveira Carvalho

Palavras-chave:

Levedura, Atividade antimicrobiana, Novas drogas

Resumo

Peptídeos antimicrobianos são componentes da imunidade inata presentes nos organismos e possuem atraente potencial biotecnológico a ser explorado como novas drogas terapêuticas. Sapucaia (Lecythis pisonis) pertence à família das Lecitidáceas e suas sementes são utilizadas como alimento sendo ricas em proteínas, lipídeos e fibras. O objetivo deste projeto é purificar e caracterizar peptídeos antimicrobianos de sementes de sapucaia e analisar a ação inibitória destes sobre microrganismos.O cotilédone foi macerado em nitrogênio líquido e colocado sob agitação por 1 h em éter de petróleo (1:30 p/v) e após sua remoção seguiu-se mais 1 h de agitação com a solução de extração (1% TFA, 1 M HCl, 5% ác. fórmico, 1% NaCl). A extração foi centrifugada (15.000 g, 10 min, 4ºC), o sobrenadante foi filtrado e aplicado em coluna de fase-reversa C18 em HPLC (Shimadzu). As frações protéicas foram eluídas em gradiente de 2-propanol de 0-34% (Egorov et al., 2005) e analisadas em gel de tricina. A atividade antimicrobiana foi inicialmente testada contra Saccharomyces cerevisae e Candida albicans em ensaio de microplaca (36 h, 620 nm) e o conteúdo protéico das amostras foi dosado por Bradford.Foram obtidas 11 frações protéicas, sendo uma não retida e 10 retidas e eluídas em gradiente de propanol. A análise eletroforética destas frações mostrou a presença de proteínas de massa molecular variando entre 3 e 14 kDa. O ensaio de atividade antimicrobiana demonstrou que as frações 4, 6 e 10 apresentaram atividade inibitória contra os dois fungos testados, nas concentrações de 10, 20 e 50 ?g/mL, respectivamente.Como conclusão 11 frações enriquecidas com peptídeos foram obtidas e destas três apresentaram atividade antimicrobiana. As próximas etapas do projeto serão a caracterização destes peptídeos por sequenciamento e testes antimicrobianos mais aprofundados.

Publicado

02-03-2012