PRODUÇÃO DE ANTICORPOS MONOCLONAIS ANTI-ORTHOPOXVIRUS PARA FINS DE IMUNODIAGNÓSTICO DE POXVIROSES BOVINA E HUMANA

Resumo

Doenças infecto-contagiosas de animais domésticos fazem parte da realidade da pecuária no Estado do Rio de Janeiro, que redundam em prejuízos econômicos. Nessa localidade vem ocorrendo surtos de vaccínia bovina que acomete o gado, os ordenhadores e seus familiares. Esses surtos são responsáveis por prejuízos na economia local. Este trabalho tem como objetivo a produção de anticorpos monoclonais para a elaboração de um teste de ELISA que permita a detecção viral no soro de humanos e animais.Os hibridomas usados neste trabalho foram obtidos de fusão de células de mieloma A2 com células esplênicas de camundongos BALB/c imunizados com Vaccinia vírus WR (VACV). Fagócitos foram obtidos de lavado peritoneal de camundongo BALB/c por injeção de 5ml de DMEM-F12 (Gibco) e depois distribuídos em placas de 96 poços (100µL/poço). Os hibridomas foram contados em câmara de Neubauer e distribuídas nos poços a concentração de 2 a 3 células/poço. Após multiplicação das células os sobrenadantes foram colhidos e testados quanto ao reconhecimento do vírus pelo teste de ELISA utilizando um controle de células Vero lisadas. Os hibridomas positivos foram clonados mais uma vez por diluição limitante.Um screening inicial por ELISA foi realizado em 14 hibridomas, contra antígenos VACV. Dois hibridomas (27C4C e 27C10A) exibiram forte reconhecimento de antígenos de VACV, sendo estes clonados 4 vezes por diluição limitante. Na fase final de clonagem o clone 27C4C demonstrou instabilidade produzindo resultados negativos no teste de ELISA, enquanto clone 27C10A afirmou sua estabilidade em mais duas subclonagens posteriores.A maior parte dos hibridomas estudados demonstrou instabilidade durante o processo de clonagem. O clone 27C10A será ampliado e submetido a ensaios de caracterização do anticorpo produzido.